
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
ML0607 | 总RNA提取试剂盒(Trizol法) | 25次 |
本产品可用于各种植物、动物、微生物的RNA提取,按照说明书上的步骤操作即可。使用时无需配制其它试剂,方便快捷,适用于RNA的快速提取。本产品所提取的RNA完整性好、纯度高,可用于分子生物学后续实验。
包装清单:
产品组成 | 包装 |
Trizol | 25mL |
氯仿 | 5 mL |
异丙醇 | 12.5 mL |
保存条件:
Trizol 4ºC保存;氯仿、异丙醇4ºC避光保存,1年内有效。
使用说明(具体操作步骤):
1.组织及细胞裂解。
a.组织:先将组织剪切成小块用液氮冷冻组织块,然后在低温下用研钵研碎组织,再加入Trizol进行总RNA抽提。
b.贴壁细胞:吸取培养液,每10平方厘米细胞加入 1ml Trizol。一般六孔板每孔加 1ml Trizol,12孔板每孔加0.5ml Trizol。晃动3-5次,再用枪吹打3次,确保全部裂解,然后吸至离心管中。
c.悬浮细胞:离心收集细胞,吸取液体,每500万个细胞中加入 1ml Trizol。用枪吹打或适当涡旋,确保全部裂解。
2.若Trizol裂解后仍有不溶物或油脂状漂浮物。需12,000g 4℃离心 10min,然后吸取澄清的Trizol裂解产物至一新的离心管中。
3.室温放置 5min,使样品充分裂解。
4.按每毫升Trizol 加入 0.2ml 氯仿,涡旋混匀15s,室温放置 3min。
5.12,000g 4℃离心 15min,后吸取含总RNA的上层无色水相至一新的离心管中。
6.按每毫升Trizol 加入0.5ml 异丙醇,颠倒数次混匀,室温沉淀 10min。
7.12,000g 4℃离心10min,在管底可见RNA沉淀,弃上清。
8.按每毫升Trizol加入 1ml 75%乙醇(DEPC水配制),涡旋或颠倒混匀。
9.7500g 4℃离心 5min,弃上清,小心吸尽液体。
10.待RNA略干后,加入 20μL DEPC水溶解,-20℃冻存。
注意事项:
1. 所有离心管,枪头及相关溶液都必须无RNA酶污染。
2. 使用冻存的细胞或组织抽提总RNA的效果通常比新鲜的细胞或组织差一些。因为在细胞或组织冻融过程中一些细
胞或组织内的RNase会被释放出来并剪切样品。如果不及时抽提RNA,请先加入适量Trizol,并裂解样品后冻存。
3. 尽量不要对着RNA样品呼气或说话,以防RNA酶污染。建议戴一次性口罩操作。
4. Trizol含有毒物质苯酚,避免接触皮肤或吸入。为防止溅入眼睛,请戴防护眼镜或使用透明保护屏。如皮肤接触
Trizol,请立即用大量去垢剂和水冲洗。
5. 使用者须自备75%乙醇(请用DEPC水配制)。
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