产品货号: WB0101           含量：100mL

产品简介：

    本品是一种传统的细胞组织快速裂解液。 RIPA 裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。RIPA裂解液的配方有很多种，根据其裂解液的强度大致可分为强/中/弱三类。RIPA 的本意是 Radio Immunoprecipitation Assay。 用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford 法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。 可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。

本品主要成分为：

（强）50mM Tris (pH 7.4)，150mM NaCl，1% Triton X-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS，以及sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白降解，并维持原有蛋白间相互作用。

（中）50mM Tris (pH 7.4)， 150mM NaCl，1% NP-40，0.5% sodium deoxycholate，0.1% SDS，以sodiumorthovanadate， sodium fluoride， EDTA， leupeptin 等多种抑制剂。 可以有效抑制蛋白降解，并维持原有蛋白间相互作用。

（弱）50mM Tris (pH 7.4)， 150mM NaCl， 1% NP-40， 0.25%sodium deoxycholate， 0.1% SDS， 以及 sodium orthovanadate， sodiumfluoride， EDTA， leupeptin 等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白降解，并维持原有蛋白间相互作用。

保存条件：-20℃保存， 12个月有效。

自备材料：
1 高速离心机
2 微量移液器
3 需自备 PMSF。PMSF可以向依科生物订购。

注意事项：
1 尽量避免多次的反复冻融，以免影响最佳使用效果。可适当分装后使用。
2 裂解样品的所有步骤都需要在冰上或 4℃进行。
3 为了您的安全和健康， 请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤(仅供参考)：
对于培养细胞样品：
室温溶解、 混匀RIPA裂解液，取适量RIPA裂解液在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
1对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。用移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接触。 通常裂解液接触细胞 1-2秒后，细胞就会被裂解。

2对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。 再用手指轻弹以充分裂解细胞。 充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管， 然后再裂解。
3充分裂解后， 10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200μl或250μl。
对于组织样品：
1.把组织剪切成细小的碎片。
2.室温溶解、 混匀 RIPA 裂解液， 取适量 RIPA 裂解液在使用前数分钟内加入 PMSF， 使 PMSF 的最终浓度为 1mM。
3.按照每 20mg 组织加入 150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液， 如果需要高浓度的蛋白样品， 可以适当减少裂解液的用量。)
4.用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5.充分裂解后，10000-14000g离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀操作。

6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
注： RIPA 裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组 DNA 等的复合物。在不检测和基因组 DNA 结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NF-kB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。